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更新時(shí)間:2024-11-04
小鼠滑膜成纖維細(xì)胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
滑膜 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X8024 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠滑膜成纖維分離自滑膜組織;滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu),各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會(huì)累及滑膜。而滑膜細(xì)胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),同時(shí)在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。骨關(guān)節(jié)炎(OA)以關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣鳎洳±砀淖兝奂瓣P(guān)節(jié)的各個(gè)組成部分,但絕不僅局限于軟骨,還包括軟骨下骨、滑膜、半月板和韌帶。各組成部分的病理改變相互影響,相互作用,共同加速關(guān)節(jié)的退變。滑膜細(xì)胞是構(gòu)成滑膜層的最大細(xì)胞群體,是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中,基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布?;び?span>A型(巨噬樣滑膜細(xì)胞)、B型(成纖維樣滑膜細(xì)胞)以及C型(樹突細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞)細(xì)胞組成?;ぜ?xì)胞主要功能:①滑膜細(xì)胞產(chǎn)生潤(rùn)滑液成分,并且與關(guān)節(jié)腔的吸收和血液/潤(rùn)滑液交換有關(guān);②滑膜細(xì)胞增生,表現(xiàn)為不依賴于支持物生長(zhǎng),并且分泌大量的效應(yīng)分子來促進(jìn)炎癥和關(guān)節(jié)損壞;③是自身自分泌和旁分泌網(wǎng)絡(luò)中效應(yīng)因子的一部分。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠滑膜成纖維采用混合酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠滑膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
小鼠滑膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸試劑盒 48T
豬乙型腦病毒(JEV)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
豬乙型腦病毒(JEV)核酸試劑盒(-PCR法) 48T
豬血栓素A2(TXA2)試劑盒
Human tendon protein R (TN-R) ELISA Kit 人肌腱蛋白R(TN-R)試劑盒
Rabbitadrenomedullin,ADMELISAKit 兔子腎上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforai-toxIgM(Humanai-toxoplasmaIgGaibody)ELISAKit人抗弓形體IgM抗體
血小板因子4(PlateletFactorIV)活性比色法定量試劑盒20次
Porcineiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISAKit豬細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)試劑盒
8號(hào)染色體開放閱讀框72抗體
豬藍(lán)耳病病毒GP5蛋白抗體
TIMP1重組小鼠 TIMP1 / TIMP / CLGI 蛋白 Protein
BOb-1(B-cell oct-binding protein 1 0.5mgBOb-1(B-cell oct-binding protein 1) B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗原
ASGR1重組人 ASGPR1 / ASGR1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
BLNK Protein Human 重組人 BLNK / Ly-57 / SLP-65 蛋白 (His 標(biāo)簽)
CLEC4F Protein Rat 重組大鼠 CLEC4F / CLECSF13 蛋白
BOb-1(B-cell oct-binding protein 1 0.5mgBOb-1(B-cell oct-binding protein 1) B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗原
BLNK Protein Human 重組人 BLNK / Ly-57 / SLP-65 蛋白 (His 標(biāo)簽)
TIMP1重組小鼠 TIMP1 / TIMP / CLGI 蛋白 Protein
CLEC4F Protein Rat 重組大鼠 CLEC4F / CLECSF13 蛋白
ASGR1重組人 ASGPR1 / ASGR1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
小鼠滑膜成纖維細(xì)胞大鼠谷酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)試劑盒 ,英文名: GAD-Ab-IgM ELISA Kit
Rabbit ierleukin 9 (IL-9) ELISA Kit 兔子白介素9(IL-9)試劑盒
粘附性大腸桿菌(EAEC)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitformIgM(HumanmembraneIgM)ELISAKit人表面膜免疫球蛋白M
體液賴(lysine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次
ELISAKitAE禽腦脊髓
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂浮;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行
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