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更新時間:2024-11-04
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
產品名稱:兔食管平滑肌細胞
組織來源:食管
產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶
培養信息:
培養基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態:成纖維細胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內狀態優良
消化液:0.25%
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔食管平滑肌體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的優良培養狀態。
細胞簡介:
兔食管平滑肌分離自食管組織;食管可分為頸段、胸段和腹段,脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端,胸段位于左、右肺之間的縱膈內,胸段通過膈孔與腹腔內腹相連,腹段很短與胃相連。哺乳動物的食管結構上由內向外分四層:黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中,肌層上1/3段為骨骼肌,下1/3為平滑肌,中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。其中,肌纖維的排列方式分為內環形和外縱形兩層。食管的蠕動是由食管平滑肌收縮嚴格控制,食管還有括約肌,位于環狀軟骨水平的,稱為食管上括約肌;位于食管下端,一部分在膈上,穿過膈孔,另一部分在膈下的高壓帶,稱為食管下括約肌。食管平滑肌細胞原代分離培養3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態大小不一,呈梭形、不規則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態學特征和生長特點。
方法簡介:
實驗室分離的兔食管平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的兔食管平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養步驟:
一、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
a)、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
b)、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯系(所拍照片將作為后續服務依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時,以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養瓶內培養基,預留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養,補加培養基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作