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更新時間:2024-11-04
兔腎小球內皮細胞
商品屬性:
組織來源 | 產品規格 | 細胞形態 | 貨號 |
腎 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | 內皮細胞樣 | YS-01X7957 |
細胞簡介:
兔腎小球內皮分離自腎組織;腎臟是機體的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物,同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質,如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等,以調節水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能,生成腎素、促紅細胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等,又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機體內環境的穩定,使新陳代謝得以正常進行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢,被鮑氏囊所包裹,是尿液形成的重要構造。血液經由入球小動脈進入腎小球。腎小球內的微血管不像其他微血管,匯流入靜脈,而是流入出球小動脈。在腎小球內,微血管受到高壓,而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進行。微血管中的血液經由超濾作用之后,形成濾液,滲入鮑氏囊內。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體,腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球內皮細胞是一類特殊微血管類型的細胞。細胞為圓形、多角形,單層貼壁生長;細胞質豐富,細胞核為圓形或卵圓形。腎小球內皮細胞被覆于腎小球毛細血管壁腔側,與血流直接接觸,是腎小球濾過膜的道屏障,可粘附細菌和白細胞,修復基底膜,并有抗凝、抗血栓的作用;所以,體外培養的腎小球內皮細胞在免疫學和病理生理學領域中具有重要的研究價值。
原代細胞的培養條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發生脫落,漂浮;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養
1、原代培養時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;
4、長期培養時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
實驗室分離的兔腎小球內皮采用先機械研磨過不銹鋼網篩分離得到腎小球、后用膠原酶消化,結合內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的兔腎小球內皮經CD31免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態:內皮細胞樣
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔腎小球內皮體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的優良培養狀態。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養方法一般有以下4種:
① 組織塊培養法
組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養法
?、?懸浮細胞培養法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。
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器官培養是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養,器官培養可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響,以及局部環境的生物調節作用。
公司正在出售的產品:
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兔II型膠原(rabbit Collagen II) 作用: ELISA 規格: 進口分裝
兔II型膠原C端肽(rabbit CTX-II) 作用: ELISA 規格: 進口分裝
兔D2聚體(rabbit 2-Dimer) 作用: ELISA 規格: 進口分裝
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組織CHK2激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
Humanproteinphosphatase1regulatorysubunitA,PPP1R1AELISAKit人蛋酸酶1調控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)試劑盒規格:96T/48T
20號染色體開放閱讀框201抗體
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CD7 CD7抗原 0.5mgCD7 CD7抗原
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IGFBP4 Protein Mouse 重組小鼠 IGFBP4 蛋白
CD7 CD7抗原 0.5mgCD7 CD7抗原
IDH1 Protein Human 重組人 IDH1 蛋白
S100A6重組小鼠 S100A6 蛋白 Protein
IGFBP4 Protein Mouse 重組小鼠 IGFBP4 蛋白
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Ratthrombospondin1,TSP-1ELISAKit 大鼠血小板反應蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforFlt3ELISAKit大鼠FMS樣酪激酶3
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Ratoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)試劑盒規格:96T/48T