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更新時間：2024-10-30

人外周血淋巴細胞

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細胞簡介：

人外周血淋巴分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。淋巴細胞（lymphocyte）是白細胞的一種，是體積最小的白細胞。其由淋巴器官產生，主要存在于淋巴管中循環的淋巴液中，是機體免疫應答功能的重要細胞成分，是淋巴系統幾乎全部免疫功能的主要執行者，是對抗外界感染和監控體內細胞變異的一線“士兵"。淋巴細胞是一類具有免疫識別功能的細胞系，按其發生遷移、表面分子和功能的不同，可分為T淋巴細胞（又名T細胞）、B淋巴細胞（又名B細胞）和自然殺傷（NK）細胞。T細胞和B細胞都是抗原特異性淋巴細胞，它們的最初來源是相同的，都來自造血組織。T淋巴細胞隨血循環到胸腺，在胸腺激素等的作用下成熟，而B細胞在骨髓中分化成熟。當受抗原刺激后，T淋巴細胞即轉化為淋巴母細胞，再分化為致敏T淋巴細胞，參與細胞免疫，其免疫功能主要是抗胞內感染、瘤細胞與異體細胞等；而B淋巴細胞是先轉化為漿母細胞，再分化為漿細胞，產生并分泌免疫球蛋白（抗體），參與體液免疫，其功能是產生抗體，提呈抗原，以及分泌細胞內因子參與免疫調節；NK細胞不依賴抗原刺激而自發地發揮細胞毒效應，具有殺傷靶細胞的作用。

原代細胞的培養條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發生脫落，漂浮；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養

　　1、原代培養時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。

方法簡介：

公司實驗室分離的人外周血淋巴采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的人外周血淋巴經過檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養法

　　③ 懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

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　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

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