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更新時間:2024-10-30
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產品名稱:人肝實質細胞
組織來源:肝臟組織
產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶
培養信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介:
人肝實質分離自肝臟組織;肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官,并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用;肝臟也制造消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里的器官,位于機體中的腹部位置,在右側橫隔膜之下,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,胃的上方。肝臟是機體消化系統中的消化腺,為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態結構:肝臟位于右上腹,隱藏在右側膈下和肋骨深面,大部分肝為肋弓所復蓋,僅在腹上區、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,肝上面則與膈及腹前壁相接。肝實質細胞是指具有肝功能的單位,是肝臟的基本組成單位之一。肝實質細胞與主要病生理變化:急性肝炎、肝硬化、肝膿腫。肝實質細胞屬于中高度分化細胞,生長營養需求高,在體外存活時間短;細胞呈圓形或多角形,核大而圓,居中,常染色質豐富,部分有雙核或多倍體核。肝臟作為體內重要的器官,在整個物質代謝過程中具有廣泛而多樣的作用。
方法簡介:
公司實驗室分離的人肝實質采用混合酶灌流消化、反復低速離心制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的人肝實質經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養步驟:
一、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
a)、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
b)、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯系(所拍照片將作為后續服務依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時,以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養瓶內培養基,預留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養,補加培養基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作