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更新時間：2024-11-05

大鼠卵泡基膜細胞

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細胞簡介：

大鼠卵泡基膜（卵泡膜細胞）分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側發育（右側已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產卵期有關。大多數脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結構，而所有鳥類只有左側卵巢有機能。卵巢是位于子宮兩側的一對卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結締組織。卵巢的內部結構可分為皮質和髓質。皮質位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結締組織構成；髓質位于中央，由疏松結締組織構成，其中有許多血管、淋巴管和神經。哺乳動物的卵巢內卵泡的發育需要相關激素的調節才能完成，垂體素（卵泡刺激素和黃體生成素）使原始卵泡開始發育，其過程中還產生大量的雌激素。雌激素是卵巢的顆粒細胞和卵泡膜細胞在垂體素的作用下協同合成的，卵泡膜細胞合成的雄激素透過基膜進入顆粒細胞，并轉變為雌激素。因此，卵泡膜細胞在生殖內分泌調節中占有關鍵的位置，了解其在病理及生理中的作用，對于與性激素有關的婦產科疾病（如多囊卵巢綜合癥、卵巢癌等）的研究有著重要意義。在哺乳動物卵泡生長發育的過程中，卵母細胞由不斷增加的顆粒細胞層包裹。卵巢組織中的膜細胞作為卵泡的外層細胞可以維持卵泡結構的完整性，參與構成卵母細胞和顆粒細胞發育的微環境且為類固醇激素的生成提供底物。在哺乳動物中調節膜細胞類固醇激素生成的機制已見相關報道，但是有關卵泡膜細胞的聚集、生長和分化的研究尚不深入。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠卵泡基膜采用先機械分離后膠原酶消化結合Percoll密度梯度離心法、并通過專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的大鼠卵泡基膜經3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件：

培養基：含FBS、EGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠卵泡基膜體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的優良培養狀態。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養法

　　③ 懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

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原代細胞的培養條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發生脫落，漂浮；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養

　　1、原代培養時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行