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訪問量:783
更新時間:2024-11-05
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
產品名稱:大鼠脈絡膜黑色素細胞
組織來源:脈絡膜
產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶
培養信息:
培養基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態:長梭形
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
大鼠脈絡膜黑色素體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的優良培養狀態。
細胞簡介:
大鼠脈絡膜黑色素分離自眼球脈絡膜組織;脈絡膜在視網膜和鞏膜之間,含有豐富血管和色素細胞,對外力沖擊的耐受性較視網膜差,當眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時,堅硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用,使脈絡膜在內外兩種作用夾攻下而發生破裂和出血。脈絡膜呈暗褐色,圍繞視神經乳頭部有照膜,為青綠色帶金屬光澤的三角形區。脈絡膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜,由纖維組織、小血管和毛細血管組成,軟而薄,棕紅色,在鞏膜和視網膜之間,續連于睫狀體后方。脈絡膜的血循環營養視網膜外層,其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養視網膜外層及玻璃體,并有遮光作用,使反射的物象清楚。同時對視覺系統起保護作用,對整個視覺神經有調節作用。續連于睫狀體后方,含豐富的血管和色素細胞,有營養和遮光作用。
方法簡介:
實驗室分離的大鼠脈絡膜黑色素先用消化、后-膠原酶混合消化結合專用培養基篩選法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的大鼠脈絡膜黑色素經Dopa染色檢測,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養步驟:
一、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
a)、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
b)、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯系(所拍照片將作為后續服務依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時,以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養瓶內培養基,預留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養,補加培養基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作
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