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訪問量:881
更新時間:2024-11-07
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
產品名稱:小鼠牙胚細胞
組織來源:牙胚
產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶
培養信息:
培養基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態:梭形、多角形
傳代特性:可傳2-3代左右
消化液:0.25%
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
小鼠牙胚體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞簡介:
小鼠牙胚分離自牙胚組織;牙胚是牙齒開始發育階段的形態,是由牙板向深層的結締組織內伸延,在其末端細胞增生,進一步發育成牙胚。牙胚有三部分組成:①成釉器(enamel organ),起源于口腔外胚層,形成釉質;②牙乳頭(dental papilla),起源于外胚層間充質,形成牙髓和牙本質;③牙囊(dental sac),起源于外胚層間充質,形成牙骨質、牙周膜和固有牙槽骨。牙胚的發生是口腔上皮和外胚間充質相互作用的結果。在胚胎的第5周,覆蓋在原口腔的上皮由兩層細胞組成,外層是扁平上皮細胞,內層為矮柱狀的基底細胞。在未來的牙槽突區,深層的外胚層間充組織誘導上皮增生,開始僅在上下頜弓的特定點上,上皮局部增生,很快增厚的上皮相互連接,依照頜骨的外形形成一馬蹄形上皮帶,稱為原發性上皮帶。在胚胎的第7周,這一上皮帶繼續向深層生長,并分裂為兩個:向頰(唇)方向生長的上皮板稱前庭板,位于舌(腭)側的上皮板稱為牙板(dental lamina)。在胚胎的第8-10周,前庭板繼續向深層生長,與發育的牙槽嵴分開,前庭板表面上皮變性,形成口腔前庭溝。
方法簡介:
實驗室分離的小鼠牙胚采用膠原酶消化法制備而來制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的小鼠牙胚經檢測,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養步驟:
一、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
a)、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
b)、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯系(所拍照片將作為后續服務依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時,以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養瓶內培養基,預留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養,補加培養基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作