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廠商性質：經銷商

訪問量：873

更新時間：2024-11-05

本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！

產品名稱：人肺癌成纖維細胞

組織來源：肺癌

產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

培養信息：

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人肺癌成纖維體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

細胞簡介：

人肺癌成纖維分離自肺癌組織；肺癌是常見的肺原發性惡性腫瘤，絕大多數肺癌起源于支氣管粘膜上皮，故亦稱支氣管肺癌。肺癌可向四周乃至全身擴散。肺癌發病率和死亡率增長快，對人群健康和生命威脅大的惡性腫瘤之一。近50年來許多國家都報道肺癌的發病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的，女性發病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不明確，大量資料表明，長期大量吸煙與肺癌的發生有非常密切的關系。肺癌，其實不是一種病，而是幾十種病的組合，有多種亞型，多種特性；根據肺癌細胞在顯微鏡下的形態特點，可以初步分為兩種類型：小細胞肺癌(SCLC)15%和非小細胞肺癌(NSCLC)85%。這兩種類型肺癌的生長特點、擴散風險和治療方案均不相同。絕大多數肺癌是非小細胞肺癌，約占85%。它又能進一步被分為三類，分別是：腺癌，鱗癌和大細胞癌。其中腺癌是主要的類型，約占非小細胞肺癌中的50%。如果是不吸煙的女性患者，幾乎全部都是腺癌。人肺癌成纖維是肺癌組織中的癌相關成纖維細胞，癌相關成纖維細胞(cancer associated fibroblast，CAF)在腫瘤微環境中的重要作用已受到廣泛的重視。該細胞通過與癌細胞的直接接觸、分泌多種因子以及對腫瘤基質的改造，促進腫瘤的發生、發展、轉移甚至耐藥性的發生。隨著研究的深入，有人提出CAF可能成為抗的新靶點。然而CAF的分化來源多樣，相應的形態和功能各異，因此深入了解CAF的分化來源有利于更全面地認識腫瘤發展的機制，為臨床治療提供理論依據，體外培養肺癌成纖維細胞對肺癌研究有重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的人肺癌成纖維采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的人肺癌成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續服務依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作