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廠商性質:經銷商
訪問量:731
更新時間:2024-11-05
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
產品名稱:人外周血T淋巴細胞
組織來源:外周血
產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶
培養信息:
培養基:基礎培養基,含IL-2、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:懸浮
細胞形態:圓形
傳代特性:不建議傳代
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
人外周血T淋巴體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞簡介:
人外周血T淋巴分離自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。外周血單個核細胞(PBMC)即外周血中具有單個核的細胞,包括淋巴細胞和單核細胞。目前,主要的分離方法是密度梯度離心法,因為血液中各有形成分的比重存在差異,因此得以分離出不同的細胞。T淋巴細胞(T-lymphocyte)來源于骨髓的多能干細胞(胚胎期則來源于卵黃囊和肝)。在人體胚胎期和初生期,骨髓中的一部分多能干細胞或前T細胞遷移到胸腺內,在胸腺激素的誘導下分化成熟,成為具有免疫活性的T細胞。成熟的T細胞經血流分布至外周免疫器官的胸腺依賴區定居,并可經淋巴管、外周血和組織液等進行再循環,發揮細胞免疫及免疫調節等功能。T細胞的再循環有利于廣泛接觸進入體內的抗原物質,加強免疫應答,較長期保持免疫記憶。T細胞的細胞膜上有許多不同的標志,主要是表面抗原和表面受體。這些表面標志都是結合在細胞膜上的巨蛋白分子。多能干細胞轉變為淋巴樣前體細胞(Lymphoid precursor)遷移至胸腺,在的誘導下,經歷一系列有序的分化過程,逐漸在胸腺發育成熟為識別各種抗原的T細胞庫。T淋巴細胞進入胸腺后首先經歷兩個階段:①早期T淋巴細胞發育階段,即始祖CIM和CD8雙陰性T淋巴細胞(double negative cell,DN)分化為CD4和CD8雙陽性T細胞(double positive cell,DP);②DP細胞分別經歷陽性選擇階段和陰性選擇階段獲取MHC限制性識別能力和對自身抗原的耐受性,發育為其表面標志為CD4或CD8的單陽性T細胞(single positive cell,SP),遷往周圍淋巴器官定居。T細胞是相當復雜的不均一體、又不斷在體內更新、在同一時間可以存在不同發育階段或功能的亞群,但分類原則和命名比較混亂,尚未統一。按免疫應答中的功能不同,可將T細胞分成若干亞群,一致的有:1、輔助性T細胞(Helper T cells,Th),具有協助體液免疫和細胞免疫的功能;2、抑制性T細胞(Suppressor T cells,Ts),具有抑制細胞免疫及體液免疫的功能;3、效應T細胞(Effector T cells,Te),具有釋放淋巴因子的功能;4、細胞毒性T細胞(Cytotoxic T cells,Tc),具有殺傷靶細胞的功能;5、遲發性反應T細胞(Delayed type hypersensitivity T cells,Td),有參與Ⅳ型反應的作用;放大T細胞(Ta),可作用于Th和Ts,有擴大免疫效果的作用;6、原始的或天然T細胞(Virgin or Natural T cells),他們和抗原接觸后分化成效應T細胞和記憶T細胞;7、記憶T細胞(Memory T cell,Tm),有記憶特異性抗原刺激的作用。T細胞在體內存活的時間可數月至數年。其記憶細胞存活的時間則更長。其中,Th細胞又被稱為CD4+細胞,因為其在表面表達CD4(cluster of differentiation 4)。通過與MHCⅡ(主要組織相容性復合體,major histocompatibility complex)遞呈的多肽抗原反應被激活。MHCⅡ在抗原遞呈細胞(antigen presenting cells,APCs)表面表達。一旦激活,可以分泌細胞因子,調節或者協助免疫反應。Tc細胞又名為CD8+細胞,其表面表達CD8。這類細胞可以通過MHCI與抗原直接結合。淋巴細胞主要包括T淋巴細胞(CD3+),B淋巴細胞(CD19+),NK細胞(CD16+CD56+)。
方法簡介:
實驗室分離的人外周血T淋巴采用取外周血、通過密度梯度離心法結合磁珠分選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的人外周血T淋巴經CD3免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養步驟:
一、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
a)、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
b)、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯系(所拍照片將作為后續服務依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時,以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養瓶內培養基,預留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養,補加培養基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作
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