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更新時間:2024-11-05
兔肺大靜脈平滑肌細胞
商品屬性:
組織來源 | 產品規格 | 細胞形態 | 貨號 |
肺靜脈 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X8340 |
細胞簡介:
兔肺大靜脈平滑肌分離自肺大靜脈組織;肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中,把動脈血由肺送回心臟的靜脈,是一個靜脈里流動脈血的血管。左右1對,共4條,兩條連接右肺,兩條連接左肺。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接,而與右心房或體靜脈系統連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動脈高壓,是由于肺靜脈內血液淤滯而引起的肺動脈高壓。正常情況下,肺循環具有血壓低、阻力小和順應性大的特點,肺動脈壓力高低取決于單位時間內肺動脈血流量和肺血管的阻力,要維持肺循環的低壓、低阻的狀態,必須保證整個肺循環系統的暢通無阻,血液順利地由肺動脈經毛細血管進入肺靜脈,再入左心室,經過左心室收縮進入體循環,才能避免肺動脈內壓力升高。肺大靜脈平滑肌細胞原代分離培養3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態大小不一,呈梭形、不規則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態學特征和生長特點。該細胞參與血管壁炎癥反應,保持靜脈管腔的通暢,還是多數動脈疾病的靶細胞。
原代細胞的培養條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發生脫落,漂浮;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養
1、原代培養時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;
4、長期培養時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
實驗室分離的兔肺大靜脈平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的兔肺大靜脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息:
培養基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態:成纖維細胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內狀態佳
消化液:0.25%
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔肺大靜脈平滑肌體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養方法一般有以下4種:
① 組織塊培養法
組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養法
③ 懸浮細胞培養法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。
④器官培養
器官培養是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養,器官培養可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響,以及局部環境的生物調節作用。
公司正在出售的產品:
小鼠神經營養因子3(-3)ELISAKit ELISA
小鼠神經營養因子4(-4)ELISAKit ELISA
小鼠骨保護素(OPG)ELISAKit ELISA
小鼠B因子(BF)ELISAKit ELISA
AlkB同源蛋白8抗體
泛素蛋白連接酶L3抗體
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0脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)重組蛋白 Recombinant Glypican 1 (GPC1)
IDI2重組人 IDI2 蛋白 Protein
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HA Protein H9N2 重組甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
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HumanCompleme1q,C1qELISAKit 人補體1q(C1q)pcr檢測試劑盒分裝
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載體/DNA產物去0酸化處理試劑盒10次
Mousedeoxypyridinoline,DPDELISAKit小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)試劑盒規格:96T/48T
兔肺大靜脈平滑肌細胞大鼠熱休克蛋白β8(HSPβ8)試劑盒 ,英文名: HSPβ8 ELISA Kit
Mouse vascular endothelial cell growth factor D (VEGF-D) ELISA Kit 小鼠血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)試劑盒
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CLIAKitforGuineapigImmunoglobulinG,IgGELISAKit豚鼠免疫球蛋白G
細胞長鏈脂酰氧化酶(acyl-CoAoxidase)活性比色法定量試劑盒20次
RatTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TGSFELISAKit大鼠腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子(TGSF)試劑盒規格:96T/48T
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