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廠商性質：經銷商

訪問量：798

更新時間：2024-11-05

本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！

產品名稱：兔脊髓神經干細胞

組織來源：脊髓

產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

培養信息：

培養基：含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細胞形態：球形

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%，Accutase

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔脊髓神經干體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

細胞簡介：

兔脊髓神經干分離自脊髓組織；脊髓是細細的管束狀的神經結構，位于脊柱的椎管內且被脊椎保護；是源自腦的中樞神經系統延伸部分。中樞神經系統的細胞依靠復雜的聯系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息。人和脊椎動物中樞神經系統的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發出成對的神經，分布到四肢、體壁和內臟。脊髓的內部有一個H形（蝴蝶型）灰質區，主要由神經細胞構成；在灰質區周圍為白質區，主要由有髓神經纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發出許多成對的神經（稱為脊神經）分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官。脊髓是周圍神經與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經的出入可把脊髓也分為相應的31節，31對脊神經就是由不同的脊椎發出的。神經干細胞是一類具有分裂潛能和自更新能力的母細胞，它可以通過不對等的分裂方式產生神經組織的各類細胞。需要強調的是，在腦脊髓等所有神經組織中，不同的神經干細胞類型產生的子代細胞種類不同，分布也不同。神經干細胞作為干細胞的一種，它具有其它所有干細胞的基本特征：具有自我維持和自我更新能力，具有多種分化潛能，具有分化為本系統大部分類型細胞的能力，這種自我更新和分化潛能可以維持相當長的時間甚至終生，對損傷和疾病具有反應能力。神經干細胞在疾病、損傷狀態下具有增殖、遷移，并向神經細胞、星形膠質細胞和少突膠質細胞分化的能力，已成為神經系統損傷修復和再生研究的熱點，體外建立穩定的神經干細胞培養模型是其基礎和臨床應用的前提。神經干細胞在培養3-4d后，可形成神經球，神經球在培養基中呈懸浮生長。

方法簡介：

實驗室分離的兔脊髓神經干采用消化后差速貼壁，結合神經干細胞專用培養基培養篩選制備而來，總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的兔脊髓神經經Nestin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續服務依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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