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更新時間:2024-11-05
兔角膜成纖維細胞
商品屬性:
組織來源 | 產品規格 | 細胞形態 | 貨號 |
眼角膜 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X8375 |
細胞簡介:
兔角膜成纖維分離自眼角膜組織;角膜位于眼球前壁的一層透明膜,約占纖維膜的前1/6,從后面看角膜呈正圓形,從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同,中央部薄。角膜有十分敏感的神經末梢,如有外物接觸角膜,眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明,角膜并沒有血管,透過外界空氣、淚液及房水獲取養份及氧氣。角膜分為五層,由前向后依次為:上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的角膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。角膜成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括:構造和維持角膜的正常形態,合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。
方法簡介:
實驗室分離的兔角膜成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的兔角膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息:
培養基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態:成纖維細胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內狀態佳
消化液:0.25%
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔角膜成纖維體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養方法一般有以下4種:
① 組織塊培養法
組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養法
③ 懸浮細胞培養法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。
④器官培養
器官培養是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養,器官培養可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響,以及局部環境的生物調節作用。
公司正在出售的產品:
豬血管生成素2(ANG-2)試劑盒 組裝/原裝
豬血管生成素1(ANG-1)試劑盒 組裝/原裝
豬血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)試劑盒 組裝/原裝
豬血管內皮細胞生長因子A(VEGF-A)試劑盒 組裝/原裝
G蛋白信號轉導調節因子8抗體
微管蛋白聚合促進蛋白24
VTN重組小鼠 Vitronectin / VTN 蛋白 (His 標簽) Protein
Ag-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein 0.5mgAg-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) ARC(多肽抗原)
TLR4重組人 TLR4 / CD284 蛋白 (His 標簽) Protein
BCL2L2 Prote僀?僀
Ag-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein 0.5mgAg-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) ARC(多肽抗原)
BCL2L2 Protein Human 重組人 BCL-W / BCL2L2 蛋白 (His 標簽)
VTN重組小鼠 Vitronectin / VTN 蛋白 (His 標簽) Protein
ERBB3 Protein Rat 重組大鼠 HER3 / ErbB3 蛋白
TLR4重組人 TLR4 / CD284 蛋白 (His 標簽) Protein
豬細胞色素氧化酶(CC0)試劑盒
Human maix metalloproteinase 3 (MMP-3) ELISA Kit 人基質金屬蛋白酶3(MMP-3)試劑盒
RabbitBcl-2AssaciatedXprotein,BAXELISAKit 兔Bcl-2相關X蛋白(BAX)試劑盒分裝
CLIAKitforai-CMVIgG(Humanai-cytomegalovirusIgGaibody,ai-CMVIgG)ELISAKit人抗巨細胞病毒抗體IgG
血液α-活性CNPG3比色法定量試劑盒50次
PorcineHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit豬熱休克蛋白20(HSP-20)試劑盒
兔角膜成纖維細胞大鼠環0腺苷(cAMP)試劑盒 ,英文名: cAMP ELISA Kit
Rabbit maix metalloproteinase 1 (MMP-1) ELISA Kit 兔基質金屬蛋白酶1(MMP-1)試劑盒
腦膜奈瑟菌W135群(NM- W135)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforMouseLactateDehydrogenase,LDHELISAKit小鼠乳酸脫氫酶
體液過氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性熒光定量試劑盒20次
ELISAKit2,3-dinor-TXB2人2,3Dinor血栓烷B2
原代細胞的培養條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發生脫落,漂浮;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養
1、原代培養時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;
4、長期培養時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行