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PCR檢測試劑盒是如何使用的?想知道嗎?

日期:2021-03-22瀏覽:732次

   PCR檢測試劑盒引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
  PCR檢測試劑盒中含有聚合酶鏈式反應所需要各種試劑組分,如:引物、dNTPs、緩沖液、Taq酶等,PCR反應液混合液中加入檢測樣品,即可進行PCR擴增反應。PCR擴增產物經瓊脂糖電泳染色判斷,陽性樣本將在相應大小的片段處出現特異性條帶。
  PCR檢測試劑盒的使用方法:
  一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
  1、注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。
  2、標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
  3、用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
  4、在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
  5、換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
  6、換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
  7、重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

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